| 연구목표 |
본 연구의 목표는 치료용 단백질을 고효율로 대량생산할 수 있는 human embryonic kidney (HEK) 기반의 새로운 인간 세포주를 설계하고, 빠르게 구축하는 것임. 이 목표를 달성하기 위하여, 첫째로, 기존의 무작위 유전자 삽입 (random integration)을 이용한 재조합 생산 HEK 세포주 제조 방식의 비효율성을 극복하기 위해, cl... |
| 연구내용 |
1차년도1. 위치 특이적 삽입을 활용한 인간 유래 세포주를 구축하기 위해 CRISPR/Cas9 시스템을 활용하기 위한 vector를 제작함. 유전체 상의 특정 위치에 DSB를 유도할 수 있는 single-guide RNA와 Cas9 단백질 발현 유전자가 포함된 벡터와, 상동 재조합을 유도하기 위한 상동 서열과 생산 유전자를 포함한 벡터를 제작함.2. 기존의... |
| 기대효과 |
급속도로 성장을 거듭하고 있는 치료용 단백질 시장에서 대부분의 발현 시스템은 설치류 유래인 CHO 세포주를 기반으로 하고 있음. 더욱 다양하고 복잡한 단백질의 개발이 증가함에 따라 인간세포를 기반으로 한 발현 시스템의 중요성도 부각되고 있음. 인간유래 세포는 CHO 세포와 비교하여 PTM에 관여하는 효소에 차이가 있어 만들어진 단백질의 활성이 CHO 세포에... |
| 키워드 |
인간세포,위치 특이적 삽입,유전자 가위,재조합 효소 기반 카세트 교환,차세대 유전체 시퀀싱,다중 유전자 삽입 |